大鼠糖原磷酸化酶同工酶(GP-II)ELISA試劑盒

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Elisa試劑盒系列：

ELISA試劑盒在國(guó)內(nèi)有許多種叫法，例如：ELISA檢測(cè)試劑盒、ELISA Kit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，比較常見(jiàn)的叫法是ELISA檢測(cè)試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒等。

ELISA試劑盒自從60-70年代問(wèn)世以來(lái)，得到科研工作者的認(rèn)可及推崇，在歐美及中國(guó)獲得很大的推廣，尤其是國(guó)內(nèi)生化領(lǐng)域的長(zhǎng)足發(fā)展。

Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀(guān)等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。

可檢測(cè)種屬

（人，小鼠，大鼠，植物，魚(yú)，蝦，蟹，牛，羊，狗，貓，微生物，細(xì)胞，土壤等動(dòng)植物）

可以檢測(cè)樣為

（血清，血漿，唾液，尿液，組織，細(xì)胞上清，裂解液等）

產(chǎn)品檢測(cè)目的：

樣本水平表達(dá)（定量檢測(cè)，定性檢測(cè)，酶活性檢測(cè)）

規(guī)格：96T 可以檢測(cè)89個(gè)樣  48T可以檢測(cè)41個(gè)樣

備注：6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)一個(gè)空白對(duì)照

有效期：6個(gè)月 保存2-8°C

大鼠糖原磷酸化酶同工酶(GP-II)ELISA試劑盒

elisa試劑盒的優(yōu)點(diǎn)：

一、高效、靈敏、特異的抗體；

二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性；

三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；

四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類(lèi)型；

五、最大限度的節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。

常用方法及原理如下：

1. 夾心法：

夾心法常用于檢測(cè)大分子抗原，一般的操作步驟為:

a. 將具有專(zhuān)一性的抗體固著（coating）于塑膠孔盤(pán)上，完成后洗去多余抗體

b. 加入待測(cè)檢體，檢體中若含有待測(cè)的抗原，則其會(huì)與塑膠孔盤(pán)上的抗體進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結(jié)

c. 洗去多余待測(cè)檢體，加入另一種對(duì)抗原專(zhuān)一的一次抗體，與待測(cè)抗原進(jìn)行鍵結(jié)

d. 洗去多余未鍵結(jié)一次抗體，加入帶有酶的二次抗體，與一次抗體鍵結(jié)

e. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果

原理：針對(duì)抗原分子上2個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物。

2. 間接法

間接法常用于檢測(cè)抗體，一般的操作步驟為：

a. 將已知的抗原固著于塑膠孔盤(pán)上，完成后洗去多余的抗原。

b. 加入待測(cè)檢體，檢體中若含有待測(cè)的一次抗體，則其會(huì)與塑膠孔盤(pán)上的抗原進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結(jié)。

c. 洗去多余待測(cè)檢體，加入帶有酶的二次抗體，與待測(cè)的一次抗體鍵結(jié)。

d. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酶底物使酶呈色，藉儀器（ELISA reader）測(cè)定塑膠盤(pán)中的吸光值（OD值），以評(píng)估有色終產(chǎn)物的含量即可測(cè)量待測(cè)抗體的含量。

原理：利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體。

3. 競(jìng)爭(zhēng)法

競(jìng)爭(zhēng)法是一種較少用到的ELISA檢測(cè)機(jī)制，一般用于檢測(cè)小分子抗原，其操作步驟為：

a. 將具有專(zhuān)一性的抗體固著于塑膠孔盤(pán)上，完成后洗去多余抗體

b. 加入待測(cè)檢體，使檢體中的待測(cè)抗原與塑膠孔盤(pán)上的抗體進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結(jié)

c. 加入帶有酶的抗原，此抗原也可與塑膠孔盤(pán)上的抗體進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結(jié)，由于塑膠孔盤(pán)上固著的抗體數(shù)量有限，因此當(dāng)檢體中抗原的量越多，則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競(jìng)相與塑膠孔盤(pán)上抗體鍵結(jié)，即所謂競(jìng)爭(zhēng)法之由來(lái)。

d. 洗去檢體與帶有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，當(dāng)檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤(pán)內(nèi)留下之帶有酶的抗原越少，顯色也就越淺。

e. 當(dāng)需要偵測(cè)無(wú)法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤(pán)上時(shí)，一般會(huì)考慮使用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA。

原理：將特異性抗體包被于固相載體表面，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和被測(cè)抗原的混合液，另一組只加酶標(biāo)記抗原，經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為所要測(cè)定的未知抗原的量。

試劑盒小貼士

1. 在收到試劑盒后，為保證檢測(cè)效果，需要根據(jù)說(shuō)明書(shū)中保存條件正確儲(chǔ)存。除非特別注明，試劑盒大多是在2～8°C條件下儲(chǔ)存

2. 在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，請(qǐng)確認(rèn)包裝中的試劑盒成分與說(shuō)明書(shū)一致，再進(jìn)行后續(xù)操作

3. 溶解標(biāo)準(zhǔn)品過(guò)程中，注意標(biāo)準(zhǔn)品是否受潮，過(guò)程中要避免產(chǎn)生泡沫

4. 為了避免交叉污染，配置不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品、上樣、加不同試劑都需要換槍頭。另外不同試劑請(qǐng)分別使用不同的移液槽

5. 每次孵育時(shí)，正確使用封板膠紙可保證結(jié)果的準(zhǔn)確性

6. 正確洗板有助于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性

7. TMB顯色底物在上板前應(yīng)為無(wú)色，請(qǐng)避光保存。加入孔板后，將由無(wú)色變成不同程度的藍(lán)色

8. 終止液上板順序需與底物上板順序一致，加入終止液，溶液顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色。如果出現(xiàn)綠色，即表明終止液與底物未混勻，請(qǐng)充分混合

實(shí)驗(yàn)詳細(xì)操作程序

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；樣本孔加待測(cè)樣本50μL。

3.  樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣ben稀釋ye40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

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